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復合物能有效地切割質粒DNA的相關研究

妙手醫生

發布時間:2022-11-14閱讀量:722次閱讀
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作者:翟夷 北京市朝陽區六里屯社區衛生服務中心(北京城建老年病醫院)

用pBR322 DNA在生理條件下的凝膠電泳,測定了復合物在輻照下切割DNA的能力。顯示了用三種不同濃度(20、40和80 μM)的配合物處理的超螺旋pBR322 DNA的凝膠電泳分離。在沒有復合物的對照通道中,或在質粒與釕復合物在黑暗中孵育中,沒有觀察到明顯的DNA裂解。當對超螺旋pBR322 DNA進行電泳時,觀察到完整的超螺旋DNA(形式I)相對快速的遷移。如果在一條鏈上發生斷裂,超卷曲的形式就會松弛,產生一個移動較慢的缺口圓形形式(形式II)。如果兩條鏈都被裂開了在超螺旋形式和缺口圓形形式之間遷移的線性形式(形式III)將生成。在360 nm下輻照30 min后,隨著配合物濃度的增加,pBR322DNA的Form I的數量逐漸減少,而Form II的數量逐漸增加。這些結果表明,復合物都能有效地切割質粒DNA。不同的裂解效率與Ru(II)復合物的dna結合親和力相一致
為了進一步闡明光裂解機制,我們研究了在單線態氧(1O2)清除劑(組氨酸)、羥基自由基(OH˙)清除劑(甘露醇和DMSO)和超氧陰離子自由基(O2?)猝滅劑(SOD)存在下的DNA裂解。在組氨酸存在的情況下,與與DNA的復合物(沒有組氨酸)相比,pBR322 DNA的光裂解缺失或更少,但在甘露醇、DMSO和SOD存在的情況下觀察到裂解。這表明單線態氧負責pBR322 DNA的裂解。單線態氧光敏劑在這兩方面都有重要的應用自然和人工光系統,因為這種活性氧是一些化學和生物過程中的關鍵中間體,如光氧化反應、光敏細胞毒性和光動力治療。
吸收和熒光發射滴定蛋白是細胞中最豐富的大分子,是維持正常細胞功能的關鍵。白蛋白是血液中血清蛋白的主要成分之一,其相互作用非常重要,因為白蛋白與非許多藥物的非共價偶聯,并已被證明在血液中攜帶活性分子。血清白蛋白蛋白參與了金屬離子和金屬配合物與藥物通過血液流動的運輸。血清白蛋白可以可逆地與大量的內源性和外源性化合物結合吸收光譜變化是測定配合物與牛血清白蛋白結合親和力的有用且非常簡單的方法。通過增加BSA濃度的加入,配合物的MLCT吸收帶上觀察到低色性和低色性。MLCT吸收帶的變化表明了BSA和Ru(II)配合物之間的配合物形成。配合物的固有結合常數Kb分別為1.12×106、9.07×105、7.03×105和2.01×106M?1。這些吸收光譜特征清楚地表明,配合物與BSA相互作用強烈。熒光光譜法是研究金屬配合物與BSA相互作用的有效方法配合物的發射強度隨著BSA濃度的增加而增加,這是由于蛋白質中的活性位點被埋在疏水環境中。這表明上述復合物與BSA有相互作用。根據斯卡查爾方程,可以比較四種配合物的固有結合常數Kb。計算了配合物的蛋白結合常數分別為2.91×106、1.47×106、8.50×105和3.31×106M?1。這些光譜結果表明,所有合成的配合物都與BSA相互作用強烈
配合物的發射強度隨著BSA濃度的增加而增加,這是由于蛋白質中的活性位點被埋在疏水環境中。這表明上述復合物與BSA有相互作用。根據斯卡查爾方程,可以比較四種配合物的固有結合常數Kb。計算了配合物的蛋白結合常數分別為2.91×106、1.47×106、8.50×105和3.31×106M?1。這些光譜結果表明,所有合成的配合物都與BSA相互作用強烈。這可能是與其他復合物相比,復合物對所有測試微生物菌株的活性更高,而復合物的抗菌活性適中,復合物的活性最低或較小。我們的假設可以進一步支持聚吡啶環上附著甲基或胺基增加親脂性,合成的配合物含有甲基,配合物與胺組。然而,觀察數據進一步表明,復合物對大腸桿菌有效, 精細的 B. 肉體和黃體表明,復雜的性質和生物細胞壁組成在推斷化合物的抗菌特性中起著重要作用。DMSO(陰性對照)未顯示任何抗菌活性,而鏈霉素(作為陽性對照)對所有測試的微生物菌株均有活性。基于DPPH清除法的抗氧化活性評價顯示,與標準DPPH相比,復合物的活性較小,而復合物的活性約為30 %,而復合物的活性僅為8%

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